На главную страницу сайта Опыты по химии Химический Юмор. Научный Юмор Опыты по физике    



Форум Химиков - Энтузиастов. Химия и Химики

Эксперименты по Химии - Практическая Химия - Книги по Химии - Физика – Астрономия – Биология – Научный Юмор
Прежде чем отправить свое сообщение - ознакомьтесь с ПРАВИЛАМИ ФОРУМА.
Прежде чем создать новую тему - воспользуйтесь ПОИСКОМ, возможно, аналогичная тема уже есть

All times are UTC [ DST ]




Post new topic Reply to topic  [ 75 posts ]  Go to page 1, 2, 3, 4  Next
Author Message
 Post subject: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология
PostPosted: 06 Aug 2012 22:15 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Сабж: а можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? Интересно вот стало. Спасибо за ответы!

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму?
PostPosted: 06 Aug 2012 22:33 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
РЕАГЕНТЫ
1. Карболовый раствор генцианвиолета 1 фл (100 мл)
2. Раствор Люголя 1 фл (100 мл)
3. Фуксин Циля 1 фл (10мл)

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Предметное стекло перед исследованием должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол.
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова , жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе .
Либо полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх.
Перед использованием фуксин Циля разводят в 10 раз дистиллированной водой. (Из расчета - к 1 мл фуксина добавляют 9 мл дистиллированной воды).

МЕТОДИКА ОКРАСКИ
1. Помещают на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносят на фиксированный мазок несколько капель карболового раствора генцианвиолета (реагент 1) и выдерживают 2-3 минуты. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и споласкивают в проточной воде (до 30 сек).
2. Мазок заливают на 1-2 мин раствором Люголя (реагент 2) до почернения препарата.
3. Раствор сливают, мазок промывают водой (водопроводной или дистилированной).
4. Дифференцируют 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают. Если вместо спирта использовать ацетон, то промывание продолжается 30 сек. Можно дифференцировать смесью спирта и ацетона (1:1) 30 с.
5. Тщательно промывают стекло в проточной или дистиллированной воде 1-2 мин
6. Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают рабочим фуксином Циля (несколько капель) в течение 1-3 минут.
7. Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму?
PostPosted: 06 Aug 2012 22:43 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Ага. А в моей методичке(записывал, когда ещё в школе были практики в универе у микробиологов - к олимпиадам готовились) был просто раствор фуксина в воде с парой капель спирта. Значит и Цилем можно. Спасибо! А сафранин можно тоже в виде карболового р-ра применять?

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму?
PostPosted: 06 Aug 2012 23:16 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
Dorif wrote:
А сафранин можно тоже в виде карболового р-ра применять?

Сафранин применяется в виде водных и водно-спиртовых растворов.
1) 0,2 — 0,5% водный раствор сафранина
2) 0,25% раствор сафранина в 10 % спирте.

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму?
PostPosted: 06 Aug 2012 23:48 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
upsidesium wrote:
Dorif wrote:
А сафранин можно тоже в виде карболового р-ра применять?

Сафранин применяется в виде водных и водно-спиртовых растворов.
1) 0,2 — 0,5% водный раствор сафранина
2) 0,25% раствор сафранина в 10 % спирте.

Спасибо!

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму?
PostPosted: 07 Aug 2012 01:47 
Offline
Участник
Участник
User avatar

Joined: 12 Mar 2012 18:57
Posts: 402
у нам была е*нутая завкафедры, вплоть до того, что этаж закрывала, что бы никто не зашел. Первый практикум у меня был покрасить образец по Ожешко, делали вчетвером и получили по "Банану" каждый.


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму?
PostPosted: 07 Aug 2012 02:13 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
нОль wrote:
Первый практикум у меня был покрасить образец по Ожешко, делали вчетвером и получили по "Банану" каждый.

Я по этому и не любил практикумы. Вечно собирается толпа возле стола да так что не подступишся. Но самое главное, что ничего путного тоже не сделаешь. Микробиология в целом мне нравилась, неприятный осадок оставило лишь свинство на сессии. А вот "бананов" полученных за практикумы (и не только) я поел на биохимии. Но там ко мне предвзято относилась бабушка-препод. Хоть какая-то ошибка сразу "банан". Мало того что на сессию чуть не опоздал, так еще и на экзамене потом боялся к ней попасть (иначе гарантия, что все лето с учебником в обнимку провел бы). Но самое главное я так и не понял чем снискал к себе такое отношение. Хотя это уже совсем другая тема.

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 07 Aug 2012 23:59 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Кстати, для метилрот(MR) теста метилрот в чём растворяют?

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 01:02 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
Dorif wrote:
Кстати, для метилрот(MR) теста метилрот в чём растворяют?

0,2 г метилового красного растворяют в 500 мл 95% этанола, затем к полученному раствору добавляют 500 мл дистиллированной воды.
Потом готовят т.н. MRVP-среду:
K2HPO4 – 5 г
Пептон – 5 г
Глюкоза – 5 г
Дист. вода - до 1 л
Суспендируют все ингридиенты в дист. воде при слабом нагреве. При этом нужно избегать изменения рН. Отбирают 5 мл готовой среды и помещают в тестовые трубки (пробирки). Которые затем стерилизуют при 1210С в течении 15 мин.
В тестовые пробирки засевается исследуемая культура (часть пробирок остается незасеянной - контрольный опыт).
Пробирки помещают в термостат на 48 ч при 370С.
После инкубации в каждую пробирку капают 3-4 капли приготовленного раствора метилового красного.
Результаты:
Желтый цвет - отрицательный.
Красный цвет (с различными оттенками) - положительный.

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 01:15 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
upsidesium wrote:
Dorif wrote:
Кстати, для метилрот(MR) теста метилрот в чём растворяют?

0,2 г метилового красного растворяют в 500 мл 95% этанола, затем к полученному раствору добавляют 500 мл дистиллированной воды.

Ага, то есть 50% этанол. Спасибо! А как среда думаю и LB(Luria-Bertani) подойдёт.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 01:52 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
Только учтите, что раствор спирта готовится по весу, а не по объему. :!:
P.S. Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология").

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 02:00 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
upsidesium wrote:
Только учтите, что раствор спирта готовится по весу, а не по объему. :!:
P.S. Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология").

Но указано-то в миллилитрах. Или я чего недопонимаю. Да, тему можно переименовать. Даже лучше переименовать. Между прочим, думаю у каждого есть запасы зелёнки - бриллиантового залёного. Её где-то в микробиологии применить можно?

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 02:08 
Offline
.
User avatar

Joined: 04 Nov 2009 22:05
Posts: 62190
Location: Моя Батьківщина там, де моя лабораторія
upsidesium wrote:
Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология").

Было бы хорошо, но нужно согласие автора.

_________________
Думайте!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 02:09 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Vladimir wrote:
upsidesium wrote:
Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология").

Было бы хорошо, но нужно согласие автора.

Да есть, есть согласие. В предыдущем моём посте ещё.) Завтра ещё фото красителей выложу, кстати.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 02:37 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
Dorif wrote:
Но указано-то в миллилитрах. Или я чего недопонимаю.

Спиртовые растворы готовятся по весу, а отпускаются по объему. - мнемоническое правило по ТЛФ.
Если Вы решили готовить по методике ничего страшного нет. А вот если хотите слить растворы заранее, то концентрация там будет совсем другая (вовсе не 50%) - контракция будь она не ладна. Да и метилрот может хуже растворяться. Так что лучше делать по методике.
Dorif wrote:
Да, тему можно переименовать. Даже лучше переименовать.

Можете сделать это сами отредактировав Ваше первое сообщение в теме. В заголовке вписываете нужное название, а вопрос касательно фуксина переносите в тело сообщения (чтобы было понятно о чем речь).

"Зеленка" используется:
- для приготовления плотных сред Левенштейна-Йенсена и Финн - II (обнаружение M. tuberculosis).
- для приготовления агаровой питательной среды с бриллиантовым зелёным, предназначенной для пересева культур и идентификации бактерий рода Salmonella (среда Кауффмана).

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму?
PostPosted: 08 Aug 2012 14:50 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
upsidesium wrote:
[
"Зеленка" используется:
- для приготовления плотных сред Левенштейна-Йенсена и Финн - II (обнаружение M. tuberculosis).
- для приготовления агаровой питательной среды с бриллиантовым зелёным, предназначенной для пересева культур и идентификации бактерий рода Salmonella (среда Кауффмана).

Спасибо! Только зелёнка за время хранения высохла.( Её как растворять?

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология
PostPosted: 08 Aug 2012 15:42 
Offline
.
User avatar

Joined: 04 Nov 2009 22:05
Posts: 62190
Location: Моя Батьківщина там, де моя лабораторія
Бриллиантовый зеленый растворим в спирте.

_________________
Думайте!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология
PostPosted: 08 Aug 2012 17:18 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Vladimir wrote:
Бриллиантовый зеленый растворим в спирте.

Это понятно. Но какую концентрацию брать?

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология
PostPosted: 08 Aug 2012 17:55 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
Готовят спиртовой раствор-заготовку который потом разводят водой до необходимой концентрации. Концентрации позже посмотрю в справочнике.

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология
PostPosted: 09 Aug 2012 02:20 
Offline
Модератор
Модератор
User avatar

Joined: 17 Nov 2009 04:45
Posts: 12792
Location: г. Волгоград
Растворяют в спирте. Готовят 0,5% спиртовой раствор который затем разводят водой, либо добавляют в среду в без разведения (количества мизерные - единицы мг в пересчете на сухой краситель).
Attachment:

Есть в нем немного и про среды с бриллиантовым зеленым.

_________________
Accidit in puncto quod non speratur in anno


Top
 Profile E-mail  
 
Display posts from previous:  Sort by  
Post new topic Reply to topic  [ 75 posts ]  Go to page 1, 2, 3, 4  Next

All times are UTC [ DST ]


Who is online

Users browsing this forum: No registered users and 43 guests


You cannot post new topics in this forum
You cannot reply to topics in this forum
You cannot edit your posts in this forum
You cannot delete your posts in this forum
You cannot post attachments in this forum

Search for:
Jump to:  

[Сообщить об ошибке, испорченном вложении, битой ссылке]
Powered by phpBB © 2000, 2002, 2005, 2007 phpBB Group